Гел електрофорезата е един от основните методи, използвани в молекулярната биология за анализ на ДНК.Този метод включва миграцията на фрагменти от ДНК през гел, където те се разделят въз основа на размер или форма.Обаче срещали ли сте някога грешки по време на вашите експерименти с електрофореза, като размазани ленти върху агарозния гел или липса на ленти върху гела?Каква може да е причината за тези грешки?
Нашите техници са обобщили няколко от отстраняването на неизправности тук за ваша справка.
1. Намазани ленти върху агарозен гел
●ДНК беше разградена.Избягвайте замърсяване с нуклеаза.
● Буферът за електрофореза не е пресен.След многократно използване на буфер за електрофореза, йонната сила намалява и стойността на pH се повишава, така че капацитетът на буфера отслабва, което се отразява на ефекта на електрофорезата.Препоръчва се честа смяна на буфера за електрофореза.
● Използвани са неподходящи условия за електрофореза.Не позволявайте напрежението да надвишава 20 V/cm и поддържайте температура <30° C по време на електрофорезата.За електрофореза с гигантска ДНК верига температурата трябва да бъде <15° C. Проверете дали буферът за електрофореза има достатъчен буферен капацитет.
● В гела е заредено твърде много ДНК.Намалете количеството на ДНК.
● Твърде много сол в ДНК.Използвайте утаяване с етанол, за да отстраните излишните соли в напреднал стадий.
● ДНК е замърсена с протеин.Използвайте фенолни екстракции, за да премахнете протеина в напреднал стадий.
● ДНК е денатурирана.Не нагрявайте преди електрофореза.Разредете ДНК в буфер с 20 mM NaCl.
2. Аномалии на миграция на ДНК ленти
● Ренатуриране на COS мястото на λHind III фрагмент.Загрейте ДНК за 5 минути под 65°C преди електрофореза и след това я охладете върху ледено устройство за 5 минути.
● Използвани са неподходящи условия за електрофореза.Не позволявайте напрежението да надвишава 20 V/cm и поддържайте температура <30° C по време на електрофорезата.Проверете дали буферът за електрофореза има достатъчен буферен капацитет.
● ДНК е денатурирана.Не нагрявайте преди електрофореза.Разредете ДНК в буфер с 20 mM NaCl.
3. Бледи или никакви ДНК ленти върху агарозен гел
● Нямаше достатъчно количество или концентрация на ДНК, заредена върху гела.Увеличете количеството на ДНК.Електрофорезата с полиакриламиден гел е малко по-чувствителна от агарозната електрофореза и натоварването на пробата може да бъде намалено по подходящ начин.
● ДНК е разградена.Избягвайте замърсяване с нуклеаза.
● ДНК е подложена на електрофореза от гела.Направете електрофореза на гела за по-малко време, използвайте по-ниско напрежение или използвайте по-висок процент гел.
● Използван е неподходящ W източник на светлина за визуализиране на ДНК, оцветена с етидиев бромид.Използвайте светлина с къса дължина на вълната (254 nm) W за по-голяма чувствителност.
4. Липсващи ДНК ленти
●ДНК с малък размер се подлага на електрофореза от гела.Направете електрофореза на гела за по-малко време, използвайте по-ниско напрежение или използвайте по-висок процент гел.
● Трудно разграничаване на ДНК лентите на подобна молекула.Увеличете времето за електрофореза и проверете концентрациятаот гела, за да сте сигурни, че процентът гел ще бъде използван правилно.
● ДНК е денатурирана.Не нагрявайте преди електрофореза.Разредете ДНК в буфер с 20 mM NaCl.
● Веригите на ДНК са огромни и конвенционалната гел електрофореза не е подходяща.Анализ на пулсова гел електрофореза.Какви други проблеми сте имали с електрофорезата в агарозен гел?Ще проучваме повече за водачи в бъдеще.
Beijing Liuyi biotechnology Co., Ltd (Liuyi Biotech) е специализирана компания, фокусирана върху продукти, свързани с електрофореза в Китай.Историята му започва през 1970 г., когато Китай все още не е навлязъл в реформата и времето за отваряне.Чрез годините на развитие, Liuyi Bitotech има своя собствена марка, която е известна като марката Liuyi на вътрешния пазар за продукти за електрофореза.
Марката Liuyi има повече от 50-годишна история в Китай и компанията може да осигури стабилни и висококачествени продукти по целия свят.Чрез годините на развитие, той е достоен за вашия избор!
Клетките за хоризонтална електрофореза (резервоари/камери) на Liuyi Biotech са с високо качество и добър външен вид.С различни размери на тави за гел, те могат да отговорят на вашите различни експериментални изисквания.Имаме собствен технически екип и фабрика.От дизайна до производството, суровините до ключовите части, ние можем да контролираме целия процес.Серията DYCP 31 е за ДНК електрофореза, която е моделDYCP-31BN, DYCP-31CN,DYCP-31DN, иDYCP-31E.Разликите между тях са в размерите на гела и цената.Предлагаме пълни размери на продуктите за нашите клиенти.МоделътDYCP-32Cможе да направи най-големия гел 250 мм * 250 мм.
Междувременно препоръчваме нашето захранване за електрофорезаDYY-6C,DYY-6DиDYY-10Cза нашите клетки за електрофореза (резервоари/камери) серии DYCP-31 и 32.
Ако искате повече информация за продуктите, моля, посетете този уебсайт, за да получите повече, и добре дошли да се свържете с нас по имейл, за да ни уведомите какво искате и да видим дали можем да предоставим решенията за вас.
За повече информация за нас, моля свържете се с нас по имейл[имейл защитен], [имейл защитен].
Време на публикуване: 9 май 2022 г