Кометният анализ (Едноклетъчна гел електрофореза, SCGE) е чувствителна и бърза техника, използвана предимно за откриване на увреждане и възстановяване на ДНК в отделни клетки. Името „Кометен анализ“ идва от характерната форма, подобна на комета, която се появява в резултатите: ядрото на клетката образува „главата“, докато увредените ДНК фрагменти мигрират, създавайки „опашка“, наподобяваща комета.
Принцип
Принципът на Comet Assay се основава на миграцията на ДНК фрагменти в електрическо поле. Интактната ДНК остава в клетъчното ядро, докато повредената или фрагментирана ДНК мигрира към анода, образувайки „опашката“ на кометата. Дължината и интензитетът на опашката са правопропорционални на степента на увреждане на ДНК.
Процедура
- Подготовка на клетките: Клетките за тестване се смесват с агароза с ниска точка на топене и се разстилат върху микроскопски предметни стъкла, за да се образува равномерен слой.
- Клетъчен лизис: Предметните стъкла се потапят в лизиращ разтвор за отстраняване на клетъчната мембрана и ядрената мембрана, разкривайки ДНК.
- Електрофореза: Предметните стъкла се поставят в камера за електрофореза при алкални или неутрални условия. Повредените ДНК фрагменти мигрират към положителния електрод под въздействието на електрическото поле.
- Оцветяване: След електрофореза предметните стъкла се оцветяват с флуоресцентно багрило (напр. етидиев бромид), за да се визуализира ДНК.
- Микроскопски анализ: С помощта на флуоресцентен микроскоп или специализиран софтуер се анализират формите на кометите и се измерват параметри като дължина и интензитет на опашката.
Изображение от биорендър
Анализ на данни
Резултатите от Comet Assay се оценяват въз основа на няколко ключови параметъра:
- Дължина на опашката: Представлява разстоянието, на което ДНК мигрира, показвайки степента на увреждане на ДНК.
- Съдържание на ДНК на опашката: Процентът на ДНК, която мигрира в опашката, често се използва като количествена мярка за увреждане на ДНК.
- Olive Tail Moment (OTM): Комбинира както дължината на опашката, така и съдържанието на ДНК в опашката, за да осигури по-изчерпателна мярка за увреждане на ДНК.
Приложения
- Проучвания за генотоксичност: Comet Assay се използва широко за оценка на ефектите на химикали, лекарства и радиация върху клетъчната ДНК, което го прави ключов инструмент за тестване на генотоксичност.
- Екологична токсикология: Помага при анализиране на въздействието на замърсителите на околната среда върху ДНК на организмите, предоставяйки представа за безопасността на екосистемите.
- Медицински и клинични изследвания: Кометният анализ се използва при изучаване на механизми за възстановяване на ДНК, рак и други заболявания, свързани с ДНК. Той също така оценява въздействието на терапиите за рак като лъчетерапия и химиотерапия върху ДНК.
- Хранителни и селскостопански науки: Използва се за оценка на безопасността на пестициди, хранителни добавки и други вещества и за изследване на техните токсични ефекти върху животински модели.
Предимства
- Висока чувствителност: Възможност за откриване на ниски нива на увреждане на ДНК.
- Лесна работа: Техниката е ясна, което я прави подходяща за скрининг с висока производителност.
- Широко приложение: Може да се прилага към различни видове клетки, включително животински и растителни клетки.
- Количествени предизвикателства: Въпреки че предоставя качествени данни за увреждане на ДНК, количественият анализ разчита до голяма степен на софтуер и техники за анализ на изображения.
- Експериментални условия: Резултатите могат да бъдат повлияни от фактори като време на електрофореза и рН, което изисква внимателен контрол на експерименталните условия.
Ограничения
Comet Assay е безценен инструмент в биомедицинските изследвания, науката за околната среда и разработването на лекарства поради своята гъвкавост и висока чувствителност при откриване на увреждане и възстановяване на ДНК. Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology)предлага камера за хоризонтална електрофореза за кометно изследване. Добре дошли да се свържете с нас, за да обсъдимКометен анализпротокол.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) е специализирана в производството на инструменти за електрофореза повече от 50 години със собствен професионален технически екип и R&D център. Разполагаме с надеждна и пълна производствена линия от проектиране до проверка и склад, както и маркетингова поддръжка. Нашите основни продукти са клетка за електрофореза (резервоар/камера), захранване за електрофореза, син светодиоден трансилюминатор, UV трансилюминатор, гел образ и система за анализ и т.н. Ние също така доставяме лабораторни инструменти като PCR инструмент, вортекс миксер и центрофуга за лаборатория.
Ако имате някакъв план за закупуване на нашите продукти, моля, не се колебайте да се свържете с нас. Можете да ни изпратите съобщение на имейл[имейл защитен]или[имейл защитен], или моля, обадете ни се на +86 15810650221 или добавете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221.
Моля, сканирайте QR кода, за да го добавите в Whatsapp или WeChat.
Време на публикуване: 20 септември 2024 г