Какво е електрофореза с полиакриламиден гел?

Електрофореза с полиакриламиден гел

Гел електрофорезата е основна техника в лабораториите в различни биологични дисциплини, позволяваща разделянето на макромолекули като ДНК, РНК и протеини. Различните среди и механизми за разделяне позволяват подгрупите от тези молекули да бъдат разделени по-ефективно чрез използване на техните физически характеристики. По-специално за протеини електрофорезата с полиакриламиден гел (PAGE) често е техниката на избор.

PAGE е техника, която разделя макромолекули като протеини въз основа на тяхната електрофоретична мобилност, тоест способността на аналитите да се движат към електрод с противоположен заряд. В PAGE това се определя от заряда, размера (молекулното тегло) и формата на молекулата. Аналитите се движат през пори, образувани в полиакриламиден гел. За разлика от ДНК и РНК, протеините варират в зависимост от включените аминокиселини, което може да повлияе на тяхното функциониране. Аминокиселинните струни могат също така да образуват вторични структури, които оказват влияние върху видимия им размер и следователно как могат да се движат през порите. Поради това понякога може да е желателно да се денатурират протеини преди електрофореза, за да се линеаризират, ако се изисква по-точна оценка на размера.

SDS СТРАНИЦА

Електрофореза с натриев додецилсулфат и полиакриламиден гел е техника, използвана за разделяне на протеинови молекули с маси от 5 до 250 kDa. Протеините се разделят единствено въз основа на тяхното молекулно тегло. Натриевият додецил сулфат, анионно повърхностно активно вещество, се добавя при приготвянето на гелове, което маскира присъщите заряди на протеиновите проби и им придава подобно съотношение на заряд към маса. С прости думи, денатурира протеините и им придава отрицателен заряд.

Родна СТРАНИЦА

Native PAGE е техника, която използва неденатурирани гелове за разделяне на протеини. За разлика от SDS PAGE, при приготвянето на гелове не се добавя денатуриращ агент. В резултат на това разделянето на протеините се извършва въз основа на заряда и размера на протеините. При тази техника, конформацията, сгъването и аминокиселинните вериги на протеините са факторите, от които зависи разделянето. Протеините не се увреждат в този процес и могат да бъдат възстановени след завършване на разделянето.

Как работи електрофорезата с полиакриламиден гел (PAGE)?

Основният принцип на PAGE е да разделя аналитите чрез преминаването им през порите на полиакриламиден гел с помощта на електрически ток. За да се постигне това, смес от акриламид-бисакриламид се полимеризира (полиакриламид) чрез добавяне на амониев персулфат (APS). Реакцията, която се катализира от тетраметилетилендиамин (TEMED), образува мрежеста структура с пори, през които аналитите могат да се движат (Фигура 2). Колкото по-висок е процентът на общия акриламид, включен в гела, толкова по-малък е размерът на порите, следователно толкова по-малки са протеините, които ще могат да преминат през тях. Съотношението на акриламид към бисакриламид също ще повлияе на размера на порите, но това често се поддържа постоянно. По-малките размери на порите също намаляват скоростта, с която малките протеини могат да се движат през гела, подобрявайки тяхната разделителна способност и предотвратявайки бързото им изтичане в буфера, когато се приложи ток.

Оборудване за електрофореза с полиакриламиден гел

Клетка за гел електрофореза (резервоар/камера)
Резервоарът за гел за електрофореза с полиакриламиден гел (PAGE) е различен от резервоара за агарозен гел. Резервоарът за агарозен гел е хоризонтален, докато резервоарът за PAGE е вертикален. Чрез клетка за вертикална електрофореза (резервоар/камера) тънък гел (обикновено 1,0 mm или 1,5 mm) се излива между две стъклени плочи и се монтира така, че дъното на гела да е потопено в буфер в една камера, а горната част да е потопена в буфер в друга камера. Когато се приложи ток, малко количество буфер мигрира през гела от горната камера към долната камера. Със здрави скоби, за да се гарантира, че модулът остава в изправено положение, оборудването улеснява бързите циркулации на гела с равномерно охлаждане, което води до различни ленти.

Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltd. (Liuyi Biotechnology) произвежда набор от размери клетки за електрофореза с полиакриламиден гел (резервоари/камери). Моделите DYCZ-20C и DYCZ-20G са клетки за вертикална електрофореза (резервоари/камери) за анализ на ДНК секвениране. Някои от клетките за вертикална електрофореза (резервоари/камери) са съвместими с blotting система, като модела DYCZ-24DN, DYCZ-25D и DYCZ-25E са съвместими с Western Blotting система модел DYCZ-40D, DYCZ-40G и DYCZ-40F, които се използват за прехвърляне на протеиновата молекула от гела към мембраната. След SDS-PAGE електрофореза, Western Blotting е техника за откриване на специфичен протеин в протеинова смес. Можете да изберете тези системи за попиване според експерименталните изисквания.

Захранване за електрофореза
За да осигурите електричество за работа на гела, ще ви е необходимо захранване за електрофореза. В Liuyi Biotechnology ние предоставяме набор от захранвания за електрофореза за всички приложения. Моделите DYY-12 и DYY-12C с високо стабилно напрежение и ток могат да отговорят на изискванията за електрофореза с високо напрежение. Има функция на стойка, синхронизация, VH и прилагане стъпка по стъпка. Те са идеални за IEF и прилагане на електрофореза за секвениране на ДНК. За общо приложение на електрофореза на протеини и ДНК имаме модела DYY-2C, DYY-6C, DYY-10 и т.н., които също са горещи захранвания с клетки за електрофореза (резервоари/камери). Те могат да се използват за приложения за електрофореза със средно и ниско напрежение, като например за използване в училищна лаборатория, болнична лаборатория и т.н. Още модели за захранвания, моля посетете нашия сайт.

Марката Liuyi има повече от 50-годишна история в Китай и компанията може да осигури стабилни и висококачествени продукти по целия свят. Чрез години развитие, той е достоен за вашия избор!

За повече информация за нас, моля свържете се с нас по имейл[имейл защитен] or [имейл защитен].

Препратки към Какво е електрофореза с полиакриламиден гел?
1. Karen Steward PhD Електрофореза с полиакриламиден гел, как работи, варианти на техниката и нейните приложения