Въведение
Гел електрофорезата е основна техника в молекулярната биология, широко използвана за разделяне на протеини, нуклеинови киселини и други макромолекули. Правилният контрол на обема на пробата, напрежението и времето за електрофореза е от решаващо значение за постигане на точни и възпроизводими резултати.Наш колега от лабораторията предлаганай-добри практики за управление на тези параметри по време на SDS-PAGE гел електрофореза.
Продукти за гел електрофореза на Beijing Liuyi Biotechnology
Обем на пробата: Осигуряване на последователност
Когато извършвате SDS-PAGE електрофореза, обемът на пробата е ключов фактор, който може значително да повлияе на разделителната способност на вашите резултати. Обикновено се препоръчва да се заредят 10 µL общ протеин на ямка. За да се осигури консистенция и да се предотврати дифузия на пробата между съседни ямки, важно е да се зареди равен обем от 1x зареждащ буфер във всички празни ямки. Тази предпазна мярка помага да се предотврати разпространението на пробите в съседните ленти, което може да се случи, ако кладенецът остане празен.
Преди да заредите вашите проби, винаги започвайте с добавяне на маркер за молекулно тегло към една ямка. Това позволява лесно идентифициране на размерите на протеина след електрофореза.
Контрол на напрежението: Балансиране на скорост и разделителна способност
Напрежението, приложено по време на електрофореза, влияе пряко както върху скоростта, с която пробите мигрират през гела, така и върху разделителната способност на разделянето. За SDS-PAGE е препоръчително да започнете с ниско напрежение от около 80V. Това първоначално ниско напрежение позволява на пробите да мигрират бавно и равномерно, концентрирайки ги в остра лента, докато влизат в разделящия гел.
След като пробите влязат напълно в разделителния гел, напрежението може да се увеличи до 120V. Това по-високо напрежение ускорява миграцията, като гарантира, че протеините са ефективно разделени според тяхното молекулно тегло. От съществено значение е да се следи развитието на фронта на бромофеноловото синьо багрило, което показва завършването на електрофорезата. За гелове с концентрация 10-12%, обикновено са достатъчни 80-90 минути; обаче, за 15% гелове, може да се наложи да удължите леко времето за работа.
Управление на времето: да знаете кога да спрете
Времето е друг критичен фактор при гел електрофорезата. Работата с гела за твърде дълъг или твърде кратък период може да доведе до неоптимално разделяне. Миграцията на бромофеноловото синьо багрило е полезен индикатор: когато достигне дъното на гела, обикновено е време да се спре. За стандартни гелове, като 10-12%, обикновено е достатъчна продължителност на електрофорезата от около 80-90 минути. За гелове с по-висок процент, като 15%, времето за работа трябва да се удължи, за да се осигури пълно разделяне на протеините.
Управление на буфери: повторно използване и подготовка на буфери
Буферът за електрофореза може да се използва повторно 1-2 пъти, в зависимост от специфичните условия на вашата лаборатория. Въпреки това, за оптимални резултати се препоръчва да приготвите пресен 10x буфер и да го разредите точно преди употреба. Това гарантира, че буферът запазва своята ефективност, което води до по-надеждни резултати от електрофореза.
Продукти за гел електрофореза на Beijing Liuyi Biotechnology
Чрез внимателно контролиране на обема на пробата, напрежението и времето за електрофореза, можете значително да подобрите точността и възпроизводимостта на вашите резултати от гел електрофореза. Прилагането на тези най-добри практики във вашата лабораторна работа ще ви помогне да постигнете по-ясни и отчетливи ленти, което води до по-добри данни за анализ надолу по веригата.
Ако имате още добри методи за оптимизиране на експеримента с гел електрофореза, добре дошли да обсъдите с нас!
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) е специализирана в производството на инструменти за електрофореза повече от 50 години със собствен професионален технически екип и R&D център. Разполагаме с надеждна и пълна производствена линия от проектиране до проверка и склад, както и маркетингова поддръжка. Нашите основни продукти са клетка за електрофореза (резервоар/камера), захранване за електрофореза, син светодиоден трансилюминатор, UV трансилюминатор, гел образ и система за анализ и т.н. Ние също така доставяме лабораторни инструменти като PCR инструмент, вортекс миксер и центрофуга за лаборатория.
Ако имате някакъв план за закупуване на нашите продукти, моля, не се колебайте да се свържете с нас. Можете да ни изпратите съобщение на имейл[имейл защитен]или[имейл защитен], или моля, обадете ни се на +86 15810650221 или добавете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221.
Моля, сканирайте QR кода, за да го добавите в Whatsapp или WeChat.
Време на публикуване: 20 август 2024 г