Принцип
Електрофореза с целулозен ацетатен филм е метод за електрофореза, използващ целулозен ацетатен филм като опора. Явлението, при което заредените частици се движат към противоположния електрод под действието на електрическо поле, се нарича електрофореза. Тъй като всеки протеин има специфична изоелектрична точка, ако протеинът се постави в разтвор с рН, по-ниско от неговата изоелектрична точка, протеинът ще бъде положително зареден и ще се придвижи към отрицателния електрод. Напротив, тя се придвижва към положителния полюс. Тъй като скоростта на протеиновите молекули, движещи се в електрическо поле, е свързана с техния заряд, формата и размера на молекулите, различни протеини могат да бъдат разделени чрез електрофореза. Серумът съдържа различни протеини, всички от които имат изоелектрични точки при pH7,5 или по-малко. Когато серумът се постави в буфер с pH 8,6 за провеждане на електрофореза, всички серумни протеини са отрицателно заредени и ще се движат към положителната страна в електрическото поле. Тъй като различните серумни протеини имат различни заряди при едно и също pH, молекулните частици са различни по размер и следователно скоростта на миграция е различна и те се разделят чрез електрофореза. Изоелектричните точки и молекулните тегла на серумните протеини са показани в таблицата по-долу:
| Протеин | Изоелектрични точки (PI) | Молекулно тегло |
| Албумин | 4.88 | 69 000 |
| α1-глулин | 5.00 | 200 000 |
| α2-глулин | 5.06 | 300 000 |
| β-глулин | 5.12 | 9 000~150 000 |
| γ-глулин | 6,85~7,50 | 156 000 ~ 300 000 |
Експериментът е да се разделят различни протеини в кръвен серум с целулозна ацетатна мембрана (съкр. CAM) като поддържаща среда. CAM е вид разпенен лосeфилм с добра равномерност, а дебелината е 0,1 mm-1,5 mm, което има известна водопоглъщаемост.
Материали, инструменти и реактиви за САМ електрофореза
мостри:здрав човешки кръвен серум
Инструмент:захранване DYY-6C, резервоар за електрофореза DYCP-38C, превъзходно зареждане на проби WD-9404
Реагентите
1) мембрана от целулозен ацетат 7X9cm
2) PH 8,6 буферен разтвор на барбитол (йонна сила 0,05-0,09, това е 0,06 tid време): вземете 1,84 g диетил барбитурова киселина и след това вземете 1,03 g диетил натриев пентобарбитал, добавете малко дестилирана вода, за да загреете, за да се разтвори, и направете до 1000 мл;
3) Петно: Ponceau S 0,2 g, трихлороцетна киселина 3 g, добавете 100 ml дестилирана вода;
4) TBS/T или PBS/T: 45 ml 95% етанол, 5 ml ледена оцетна киселина, добавете 50 ml дестилирана вода;
5) Почистващ разтвор: 70 ml безводен етанол, 30 ml ледена оцетна киселина.
Експериментирайте Метоd
1) Подгответе мембраната: Потопете мембраната в буферния разтвор на барбитол за 30 минути-8 часа и я извадете, отстранете допълнителния разтвор с абсорбираща хартия.
2) Зареждане на проби: Разграничете грапавата и гладката страна на мембраната и маркирайте линия на разстояние 1,5 cm до горния край на грапавата страна. Заредете проби с превъзходен инструмент за зареждане на проби от грапавата страна. Забележка: Пробите трябва да се зареждат върху грапавата страна на мембраната. След като серумните проби проникнат напълно в мембраната, обърнете мембраната, поставете грапавата страна (с пробите) с лицето надолу към резервоара и краят с пробите се поставя в отрицателния електрод.
3) Електрофореза: Включете захранването, 0,4～0.6m A/cm мембрана, времето за работа е 30-45 минути. След провеждане на електрофореза, изключете захранването.
4) Оцветете и почистете: Извадете мембраната от резервоара и я потопетеit в разтвора на багрилото за 5 минути и след това го почистете в почистващия разтвор отново и отново за 3-4 пъти, докато цветът на фона стане ясен. Серумните протеини трябва да се показват на лентите и обикновено има пет зони, формиращи горния край на маркираната линия, албумин, α1-глоулин, α2-глоулин, β-глоулин, γ-глоулин.
5) Консервиране: поставете суха електрофорезалентав почистващ разтвор за 10-15 минути, след което го извадете и го залепете върху чисто стъкло, след като изсъхне, ще стане прозрачен филмлента.
ЕкспериментирайтеРезултат
Ефектът на разделяне на серумните проби е добър и няма феномен на опашка. Повторяемостта на резултатите варира в зависимост от тестовите процедури и методите на експериментатора и повторяемостта е висока.
Заключение
Системата за бързо откриване на клинична електрофореза (Резервоар за електрофорезаDYCP-38C,захранванеDYY-6C и превъзходно зареждане на проби WD-9404), произведени от нашиякомпания Beijing Liuyi Biotechnology Co., Ltdотговаря на експерименталните изисквания,ирезултатите са възпроизводими, прости и бързи, подходящи запреподаванеизследвания.
Пекин ЛюиBiotechnology Co., Ltd е специализирана в производството на продукти за електрофореза за индустрията на науките за живота, коитоима повече от 50-годишна история в Китай и компанията може да осигури стабилни и висококачествени продукти по целия свят. След години на развитие, той е достоен за вашия избор!
Сега търсим партньори, както OEM резервоар за електрофореза, така и дистрибутори са добре дошли.
За повече информация за нас, моля свържете се с нас по имейл[имейл защитен]или[имейл защитен].
Време на публикуване: 14 ноември 2022 г