Подготовка на пробата иЗарежда се
Поради използването на непрекъсната буферна система без натрупване на гел в повечето случаи, пробите трябва да имат подходяща концентрация и малък обем. Използвайте aпипетабавно добавяне на пробата с 5-10 μg на ямка, за да се избегне значително намаляване на разделителната способност. Когазареждане на проба, захранването трябва да бъде изключено. Пробата трябва да съдържа индикаторно багрило (0,025% бромофенол синьо или оранжево) и захароза (10-15%) или глицерол (5-10%), за да се увеличи нейната плътност, да се концентрира пробата и да се предотврати дифузията. Въпреки това, понякога захарозата или глицеролът могат да причинят U-образни ивици в резултатите от електрофорезата, което може да се избегне чрез използване на 2,5% Ficoll (поливинилпиролидон).
Електрофореза
Напрежението за електрофореза е 5-15 V/cm, обикновено около 10 V/cm. За разделянето на големи молекули напрежението трябва да е по-ниско, обикновено не надвишаващо 5 V/cm.
Оцветяване
Флуоресцентното багрило етидиев бромид (EB) обикновено се използва за оцветяване за наблюдение на ДНК ленти в агарозен гел. EB може да се вмъкне между базови двойки ДНК молекули, което кара EB да се свърже с ДНК. Абсорбцията на 260 nm ултравиолетова светлина от ДНК се прехвърля към EB и свързаният EB излъчва флуоресценция при 590 nm в червено-оранжевата област на спектъра на видимата светлина. Оцветяването на гела в 1 mmol/L разтвор на MgSO4 за 1 час може да намали фоновата флуоресценция, причинена от несвързан EB, улеснявайки откриването на малки количества ДНК.
EB боята има няколко предимства: лесна е за използване, не разрушава нуклеиновите киселини, има висока чувствителност и може да оцветява както ДНК, така и РНК. EB може да се добави към пробата и да се проследи с помощта на UV абсорбция по всяко време. След оцветяване EB може да се отстрани чрез екстракция с n-бутанол.
Въпреки това, EB боята е мощен мутаген и трябва да се вземат предпазни мерки, като например носене на полиетиленови ръкавици, по време на работа. Акридиновото оранжево също е често използвано багрило, тъй като може да прави разлика между едноверижни и двойноверижни нуклеинови киселини (ДНК, РНК). Той проявява зелена флуоресценция (530 nm) за двойноверижни нуклеинови киселини и червена флуоресценция (640 nm) за едноверижни нуклеинови киселини. Освен това други багрила като метиленово синьо, метиленово зелено и хинолин В могат да се използват за оцветяване.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) е специализирана в производството на инструменти за електрофореза повече от 50 години със собствен професионален технически екип и R&D център. Разполагаме с надеждна и пълна производствена линия от проектиране до проверка и склад, както и маркетингова поддръжка. Нашите основни продукти са клетка за електрофореза (резервоар/камера), захранване за електрофореза, син светодиоден трансилюминатор, UV трансилюминатор, гел изображение и система за анализ и др.
Сега търсим партньори, както OEM резервоар за електрофореза, така и дистрибутори са добре дошли.
Ако имате някакъв план за закупуване на нашите продукти, моля, не се колебайте да се свържете с нас. Можете да ни изпратите съобщение на имейл[имейл защитен]или[имейл защитен], или моля, обадете ни се на +86 15810650221 или добавете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221.
Моля, сканирайте QR кода, за да го добавите в Whatsapp или WeChat.
Време на публикуване: 20 декември 2023 г