1. Класификация
Гел електрофорезата се разделя на вертикални типове (включително колонни гелове и плочи гелове) и хоризонтални типове (главно плочи гелове) (Фигура 6-18). Като цяло вертикалното разделяне е малко по-добро от хоризонталното, но хоризонталното приготвяне на гел има поне четири предимства: има опора под целия гел, което позволява използването на агароза с ниска концентрация; възможно е да се приготвят плочки с агарозен гел с различни спецификации; подготовката на гела и зареждането на пробата са по-удобни; камерата за електрофореза е лесна за конструиране и рентабилна. Тъй като хоризонталната електрофореза се извършва с плоча с агарозен гел, напълно потопена на около 1 mm под повърхността на буфера за електрофореза, тя се нарича още потопена електрофореза.
Резервоар за електрофореза DYCP-31DN за електрофореза в агарозен гел
2.Буферна система
При разделянето на нуклеинова киселина повечето системи приемат непрекъснати системи. Често използваните буфери за електрофореза включват TBE (0.08mol/L Tris·HCl, pH 8.5, 0.08mol/L борна киселина, 0.0024mol/L EDTA) буфер и THE (0.04mol/L Tris·HCl, pH 7.8, 0.02mol/L натриев ацетат, 0,0018 mol/L EDTA) буфер. Тези буфери обикновено се приготвят като 10x основни разтвори и се разреждат до необходимата концентрация, когато се използват. Скоростите на миграция на линейна и кръгова ДНК в агарозен гел варират в зависимост от използвания буфер. В THE буфера скоростта на миграция на линейната ДНК е по-голяма от тази на кръговата ДНК, докато в TBE буфера е обратното.
3. Приготвяне на агарозен гел
(1) Приготвяне на хоризонтален агарозен гел
(a) Пригответе необходимата концентрация на агарозен гел, като използвате 1x буфер за електрофореза.
(b) Загрейте агарозата до пълно разтваряне във вряща водна баня, на магнитна бъркалка или в микровълнова печка. Охладете агарозния разтвор до 55°C и добавете багрилото етидиев бромид (EB) до крайна концентрация от 0,5 μg/ml.
(c) Запечатайте краищата на стъклени или акрилни плочи с малко количество агарозен гел, добавете гребен и поставете зъбците на гребена на около 0,5~1,0 mm над плочата.
(d) Разтопеният разтвор на агарозен гел се излива непрекъснато в стъклена или акрилна плоча (дебелината зависи от обема на ДНК пробата), като се избягва въвеждането на въздушни мехурчета. Оставете да се втвърди естествено на стайна температура.
(e) Внимателно отстранете гребена след пълно втвърдяване. Добавете подходящо количество буфер за електрофореза към резервоара за гел, като се уверите, че плочата с гел е потопена на около 1 mm под повърхността на буфера за електрофореза.
(2) Приготвяне на вертикален агарозен гел
(a) Отстранете мазнините или остатъците от стъклените плочи чрез измиване с етанол.
(b) Поставете дистанционни плочи между предните и задните прегради, подравнете ръбовете на дистанционните плочи с предните и задните прегради и ги закрепете със скоби.
(c) Добавете 2% агароза в 1x буфер между краищата на разделителните плочи, за да образувате 1 cm висока агарозна запушалка на дъното на камерата за отливане на гел.
(d) Изсипете разтопения агарозен гел с желаната концентрация, приготвен в 1x буфер, в камерата за гел до 1 cm под горната част.
(д) Поставете гребена, като избягвате задържането на въздушни мехурчета под зъбите на гребена. Понякога могат да се появят бръчки по зъбите на гребена по време на охлаждане с агарозен гел; в такива случаи просто добавете малко разтопена агароза на върха, за да я втвърдите.
(f) Отстранете гребена. За да предотвратите изтичане на буфер в слота за зареждане, запечатайте връзката между плочата с агарозен гел и камерата за електрофореза с 2% агароза и добавете необходимото количество буфер.
(g) Добавете 1x буфер за електрофореза към камерата с гел.
(h) Внимателно заредете ДНК проби върху агарозния гел под буфера.
Повече информация за основните познания за електрофорезата в агарозен гел ще споделим следващата седмица. Пожелавам тази информация да бъде полезна за вашия експеримент.
Beijing Liuyi Biotechnology Co. Ltd (Liuyi Biotechnology) е специализирана в производството на инструменти за електрофореза повече от 50 години със собствен професионален технически екип и R&D център. Разполагаме с надеждна и пълна производствена линия от проектиране до проверка и склад, както и маркетингова поддръжка. Нашите основни продукти са клетка за електрофореза (резервоар/камера), захранване за електрофореза, син светодиоден трансилюминатор, UV трансилюминатор, гел изображение и система за анализ и др.
Сега търсим партньори, както OEM резервоар за електрофореза, така и дистрибутори са добре дошли.
Ако имате някакъв план за закупуване на нашите продукти, моля, не се колебайте да се свържете с нас. Можете да ни изпратите съобщение на имейл[имейл защитен]или[имейл защитен], или моля, обадете ни се на +86 15810650221 или добавете Whatsapp +86 15810650221, или Wechat: 15810650221.
Моля, сканирайте QR кода, за да го добавите в Whatsapp или WeChat.
Време на публикуване: 07 декември 2023 г